Vorsichtsmaßnahmen für die Zellkultur
Vorsichtsmaßnahmen für die Zellkultur
(1) Wenn Sie eine bestimmte Zelle zum ersten Mal kultivieren, müssen Sie zuerst nach dem Namen der Zelle suchen, um relevante Informationen zu verstehen, einschließlich Kulturmedium, Serum, Zusatzstoffe, normale Verdauungszeit, Passagezeit usw. Für bestimmte Zellen (z als primär kultivierte Zellen), ist es notwendig, die einschlägige Literatur zu konsultieren, um genauere Kulturmethoden zu erhalten.
(2) Beim Betreten der Zelle zu Zellkultur müssen die folgenden Schritte strikt eingehalten werden:
① Stellen Sie sicher, dass alle Lösungen und Verbrauchsmaterialien für den Zellbetrieb einwandfrei desinfiziert und getestet wurden. Verwenden Sie keine unsicheren Lösungen und Verbrauchsmaterialien. Leihen Sie die Lösungen anderer nicht aus, es sei denn unter besonderen Umständen.
② Stellen Sie sicher, dass die Manschetten der Kleidung aufgerollt oder die Manschetten des weißen Kittels geschlossen sind.
③ Ermitteln Sie die Alkoholmenge in der Alkohollampe und füllen Sie diese gegebenenfalls nach.
④ Stellen Sie sicher, dass alle benötigten Lösungen und Verbrauchsmaterialien in Reichweite sind. Um den Flaschenverschluss mit einer Hand zu öffnen, können alle Flaschenverschlüsse vor dem Experiment gelöst werden.
⑤ Versuchen Sie, die Lösung nicht direkt einzugießen, es sei denn, die Flaschenöffnung ist nicht verbrannt. Wenn das Ausgießen fehlschlägt und die Lösung an der Flaschenöffnung klebt, reinigen Sie bitte vorsichtig die Umgebung der Flaschenöffnung mit einem mit 75%igem Alkohol besprühten Papiertuch (berühren Sie nicht die Flaschenöffnung) und verbrennen Sie es auf der Flamme.
⑥ Wenn die Sauberkeit der verwendeten Verbrauchsmaterialien während des Betriebs nicht gewährleistet ist, müssen sie rechtzeitig ersetzt werden.
⑦ Räumen Sie nach dem Experiment rechtzeitig auf, halten Sie den Arbeitsbereich sauber und ordentlich und reinigen Sie abschließend den Tisch mit 75%igem Alkohol.
(3) Verhinderung einer Zellkontamination
① Der Laborbedarf verhindert Verschmutzung. Die für die Zellkultur verwendeten Reagenzien, Verbrauchsmaterialien und Geräte müssen gründlich gereinigt und desinfiziert werden, und die Sterilisation verschiedener Lösungen muss sorgfältig erfolgen und dürfen erst nach negativem Sterilitätstest verwendet werden. Der Operationssaal und die übrige sterile Ausstattung sind regelmäßig zu reinigen, zu desinfizieren und zu sterilisieren.
② Verschmutzung während des Betriebs verhindern.
③ Kleidung, die leicht statische Elektrizität erzeugt oder Staub absorbiert, muss vor dem Betreten der Zellen durch weiße Mäntel ersetzt werden.
④ Vor Versuchsbeginn muss sichergestellt werden, dass es keine Probleme mit den Handschuhen gibt. Solange die Handschuhe mit Gegenständen außerhalb der Biosicherheitswerkbank in Kontakt kommen, müssen die Handschuhe rechtzeitig desinfiziert werden.
⑤ Schließen Sie nach dem Betreten des Zellkulturraums die Tür, setzen Sie sich hin und gehen Sie so wenig wie möglich, um den Luftschleier der Biosicherheitswerkbank nicht zu beeinträchtigen. Wischen Sie Hände und Flaschenverschlüsse vor der Arbeit mit Wattebällchen mit 75 %igem Alkohol ab. Überprüfen Sie die verwendeten Geräte, Lösungen und Zellen im Voraus genau. Bringen Sie kontaminierte oder nicht sterilisierte Artikel nicht in den Sterilraum, geschweige denn verwenden Sie sie beiläufig, um eine großflächige Verschmutzung zu vermeiden.
⑥ Der Betrieb der Zellen sollte leicht sein. Die Flaschenmündung muss im sterilen Bereich um die Flamme herum geöffnet werden, und die Flaschenmündung muss zum einfachen Drehen und Brennen um die Flamme herum platziert werden. Achten Sie darauf, dass die Flamme nicht die Öffnung der Plastikflasche verbrennt.
⑦ Während des Versuchsbetriebs sollte die Trennwand der Biosicherheitswerkbank so niedrig wie möglich sein, um Gespräche zu minimieren. Beim Niesen oder Husten darf es nicht in den Arbeitsbereich blicken, um unnötige Verschmutzungen zu vermeiden.
⑧ Der Flaschenverschluss sollte auf den Kopf gestellt werden, um zu verhindern, dass der Flaschenverschluss durch Fehlbedienung verschmutzt wird.
⑨ Gehen Sie nicht über den offenen Behälter, um eine Zellkontamination durch unbekannte Gegenstände zu vermeiden, die auf die Kleidung fallen.
⑩ Achten Sie während des Versuchsbetriebes auf den rechtzeitigen Austausch von Pasteurpipette, Pipettenkopf und Pipette und führen Sie eine Pipette nicht zu Ende. Bei Kontakt mit unsauberen oder unbestimmten Artikeln müssen diese direkt entsorgt werden. Nach dem Versuch ist es rechtzeitig zu reinigen, um das Labor sauber und aufgeräumt zu halten. Abschließend wird die Tischplatte mit 75%igem Alkohol gereinigt.
(4) Kreuzkontamination von Zellen verhindern
① Bei der Durchführung einer Vielzahl von Zellkulturoperationen sollten die verwendeten Instrumente streng unterschieden werden, und es ist besser, sie zur Identifizierung zu markieren. Die Operation wird nacheinander ausgeführt, und es wird jeweils nur eine Zelle verarbeitet. Wenn mehrere Zellen und mehrere Operationen zusammen ausgeführt werden, ist es wahrscheinlich, dass Verwirrung auftritt.
② Während des Flüssigkeitsaustauschs oder des Durchgangsvorgangs dürfen der Pipettenkopf und die an den Zellen befestigte Pipette die Mündung der Reagenzflasche nicht berühren, um zu vermeiden, dass die Zellen in das Kulturmedium gelangen und andere Zellen verunreinigen.
③ Sobald alle Zellen gekauft, von anderen Orten eingeführt oder selbst hergestellt wurden, müssen sie rechtzeitig konserviert und eingefroren werden. Im Falle einer Verschmutzung können die Zellen wiederbelebt und weiter kultiviert werden.